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除了两位水管工兄弟，游戏中的经典角色也在电影中亮相。碧姬公主作为蘑菇王国意志坚定的统治者，在片中对马力欧进行了严酷的作战训练，以帮助后者挖掘自身潜力。喜剧演员杰克·布莱克、塞斯·罗根则为片中的大反派酷霸，以及“搞笑担当”大猩猩咚奇刚配音。值得一提的还有，为游戏中的马力欧和路易吉兄弟配音长达三十余年的查尔斯·马丁内斯，也在片中友情客串。

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